欲測(cè)定新鮮綠葉中葉綠素a和葉綠素b的含量，可通過(guò)測(cè)定色素提取液的光密度值（OD值，各吸光物質(zhì)的總OD值），再根據(jù)以下公式計(jì)算：葉綠素a濃度=12.72D₆₆₅-2.59D₆₄₉；葉綠素b濃度=20.13D₆₄₉-5.03D₆₆₅
（D₆₆₅、D₆₄₉表示光程為1cm、波長(zhǎng)分別為665nm、649nm所測(cè)得的OD值）。
儀器與用具：OD值測(cè)定儀一套、天平、研缽、25mL容量瓶、漏斗、濾紙、95%乙醇、石英砂、碳酸鈣等。
（1）完善實(shí)驗(yàn)步驟
①取材：取新鮮植物葉片，擦凈，剪碎（去掉中脈），混勻。
②研磨：稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣及2～3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成

勻漿

勻漿

，再加入乙醇10mL，繼續(xù)研磨至組織變白，并靜置3～5min。
③過(guò)濾：在漏斗中放置濾紙，用乙醇濕潤(rùn)，把研磨液沿玻璃棒倒入漏斗，過(guò)濾到25mL棕色容量瓶中，然后用少量95%乙醇沖洗研棒、玻璃棒、

研缽

研缽

及

殘?jiān)?/div>

殘?jiān)?/div>數(shù)次，洗滌液一并倒入漏斗中過(guò)濾，再用95%乙醇，將漏斗中色素全部洗入容量瓶，直至濾紙和殘?jiān)儼诪橹?。最后定容?5mL。
④測(cè)定：把色素提取液搖勻，倒入

光程為1cm的比色杯

光程為1cm的比色杯

內(nèi)，以

95%乙醇

95%乙醇

為空白對(duì)照，在光波長(zhǎng)665nm、649nm條件下分別測(cè)定OD值。
⑤計(jì)算
（2）實(shí)驗(yàn)分析：
①過(guò)濾和定容選擇的容量瓶為棕色的目的是為了防止

葉綠素分解

葉綠素分解

。在測(cè)定葉綠素OD值時(shí)，選擇波長(zhǎng)665nm、649nm的紅光，以防類胡蘿卜素的干擾，其原因是

類胡蘿卜素不吸收紅光

類胡蘿卜素不吸收紅光

。
②本實(shí)驗(yàn)中，

不需要

不需要

（需要/不需要）先作葉綠素a、b的標(biāo)準(zhǔn)曲線用于獲得濃度值。
③若根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得到葉綠素a和葉綠素b的濃度分別為Ca、Cb（單位mg/L），則待測(cè)植物新鮮葉片中葉綠素的含量是

C

a

+

C

b

8

C

a

+

C

b

8

mg/g（用Ca、Cb表示）。