近年來(lái)，過度依賴提高養(yǎng)殖密度和過量投餌的養(yǎng)殖方式，導(dǎo)致出現(xiàn)養(yǎng)殖環(huán)境生態(tài)失調(diào)、病害頻發(fā)、水資源浪費(fèi)和污染嚴(yán)重等現(xiàn)象。益生菌能夠改善水質(zhì)，抑制有害菌的生長(zhǎng)，保持微生態(tài)平衡，是水產(chǎn)動(dòng)物防控病害的有效手段之一。研究人員從鯽魚腸道樣品中分離出具有抑菌效果的菌株，為開發(fā)適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的抑菌類微生態(tài)制劑提供參考。抑菌效果用指示菌（嗜水氣單胞菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等有害菌）進(jìn)行檢驗(yàn)。用到LB液體培養(yǎng)基：蛋白胨1%、酵母膏0.5%、氯化鈉0.5%、水100mL。請(qǐng)回答下列問題：
（1）LB液體培養(yǎng)基中的蛋白胨能為微生物提供

碳源、氮源（和維生素）

碳源、氮源（和維生素）

；用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，水沸騰后，待

冷空氣徹底排除后

冷空氣徹底排除后

，再關(guān)閉排氣閥。
（2）將樣品鯽魚腸道內(nèi)容物制成稀釋液，接種至LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)，目的是

增加目的菌的數(shù)量

增加目的菌的數(shù)量

；將富集培養(yǎng)液加至LB固體培養(yǎng)基平板，涂布均勻，37℃恒溫培養(yǎng)。配制LB固體培養(yǎng)基時(shí)，通常需向LB液體培養(yǎng)基中加入

瓊脂（凝固劑）

瓊脂（凝固劑）

；菌落長(zhǎng)出后，常采用

平板劃線

平板劃線

法將其轉(zhuǎn)接種到新的平板上進(jìn)一步純化，得到初篩菌株。
（3）采用打孔法測(cè)定初篩菌株的抑菌效果：吸取稀釋好的

指示

指示

菌液0.6mL加入平板；使用2.7mm的直徑打孔器，在平板上垂直均勻打孔，標(biāo)記菌株編號(hào)，每孔分別注入10μL

初篩菌株

初篩菌株

菌液，培養(yǎng)24h。每個(gè)樣品做3個(gè)平板。培養(yǎng)完畢，檢測(cè)板上出現(xiàn)抑菌圈，測(cè)量

抑菌圈的直徑（大?。?/div>

抑菌圈的直徑（大?。?/div>，取平均值。
（4）經(jīng)鑒定，菌株YJ4的抑菌效果最好，為進(jìn)一步驗(yàn)證菌株YJ4的安全性，選擇健康鯽魚80尾，隨機(jī)均分為4組。實(shí)驗(yàn)組分別采用腹腔注射法注射0.1mL濃度分別為1×10⁹、1×10⁸和1×10⁷單位/mL的YJ4菌懸液，適宜條件下飼養(yǎng)7d,觀察并記錄實(shí)驗(yàn)魚游動(dòng)、攝食及死亡情況，最后剖檢，觀察有無(wú)病變，對(duì)照組的處理為

采用腹腔注射法注射0.1mL生理鹽水

采用腹腔注射法注射0.1mL生理鹽水

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