角蛋白酶（KerA）是降解角蛋白的酶類，在飼料工業(yè)中具有較大的應用前景，但天然菌株產酶量低限制了其推廣應用。為了獲得高效表達的KerA工程菌，研究者分別構建了大腸桿菌和畢赤酵母工程菌，并實現(xiàn)了異源表達。圖1為含KerA基因的外源DNA、質粒的有關信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均為限制酶，Kanr、Tcr分別為卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因。請回答下列相關問題：
（1）為了獲取KerA基因，從天然菌株中提取相應的DNA片段，再通過PCR技術大量擴增，PCR技術的原理 DNA雙鏈復制DNA雙鏈復制，前提是 要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物。
（2）為了形成合適的重組質粒，應該選用 BamHⅠBamHⅠ和 XhoⅠXhoⅠ限制酶切割外源DNA和質粒DNA。
（3）重組質粒導入受體細胞的成功率很低，需經篩選才能獲得導入成功的受體細胞。結合圖1所獲得的重組質粒分析，應選擇具有 在卡那霉素的培養(yǎng)基上不能生長（在四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長不生長）在卡那霉素的培養(yǎng)基上不能生長（在四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長不生長）特點的細胞作為受體細胞，才有利于后續(xù)的篩選。
（4）將目的基因導入大腸桿菌時，常出現(xiàn)三種情況：未轉化的細菌、含空載體（普通質粒）的細菌、含重組質粒的細菌。圖2是KerA基因重組質粒的“工程菌”的篩選示意圖：圖中的 BB和 DD（選用“A/B/C/D/E”字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。
（5）KerA基因在大腸桿菌和畢赤酵母工程菌是否能實現(xiàn)異源表達，需要用抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術檢測，若在二者細胞中都能實現(xiàn)表達，從分子水平上分析原因是 抗原-抗體雜交技術 共用一套遺傳密碼抗原-抗體雜交技術 共用一套遺傳密碼，并且它們體內轉錄和翻譯的過程或機制相同。但經研究發(fā)現(xiàn)，只有畢赤酵母工程菌表達合成的KerA可直接投入使用，分析其原因是 畢赤酵母是具有內質網、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結構）的蛋白質畢赤酵母是具有內質網、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結構）的蛋白質。
（6）KerA在60℃以上時熱穩(wěn)定性差，限制了該酶的應用范圍，研究人員在KerA的末端插入半胱氨酸，這不僅對酶活性影響小，且大大提高了其熱穩(wěn)定性。其運用到的這種現(xiàn)代生物技術為 蛋白質工程蛋白質工程。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA雙鏈復制；要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成引物；BamHⅠ；XhoⅠ；在卡那霉素的培養(yǎng)基上不能生長（在四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長不生長）；B；D；抗原-抗體雜交；抗原-抗體雜交技術 共用一套遺傳密碼；畢赤酵母是具有內質網、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結構）的蛋白質；蛋白質工程
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：179難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6