湖北麻城老米酒具有悠久的歷史,以營養(yǎng)豐富、保健養(yǎng)生而著稱?;卮鹣铝袉栴}:
(1)老米酒是以糯米為原料,經(jīng)糖化、酒化等過程發(fā)酵而來的。糯米需經(jīng)糖化后才能被釀酒酵母轉(zhuǎn)化成酒精,原因是 酵母菌不能直接利用淀粉作為碳源酵母菌不能直接利用淀粉作為碳源。為監(jiān)測發(fā)酵過程中酵母菌數(shù)量的變化,可定期取樣,用 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法或血細胞計數(shù)板法計數(shù)。
(2)老米酒中的原兒茶酸(PCA)具有良好抗菌、抗氧化、抗炎癥等作用。生成PCA的關(guān)鍵酶是烯酰輔酶A水合酶(ECH)。為進一步研究ECH的結(jié)構(gòu),研究人員擬將Ech基因載入原核高效表達載體,并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細胞內(nèi)進行表達,以獲得大量的ECH蛋白。
①圖1所示的引物1~4中,利用PCR獲得Ech基因時應(yīng)選擇的兩種引物是 引物2和引物3引物2和引物3。

②Ech基因和表達載體的限制酶切位點如圖1、圖2所示,相關(guān)限制酶的識別序列見表1。為使Ech基因與載體連接并正確表達,在設(shè)計PCR引物時需在①所選兩種引物的5'端分別增加限制酶 EcoRⅠ和HindⅢEcoRⅠ和HindⅢ的酶切位點,據(jù)此分析,兩種引物的堿基序列應(yīng)分別為 5'—GAATTCATG—3'和5'—AMGCTTTCA—3'5'—GAATTCATG—3'和5'—AMGCTTTCA—3'(按5'→3'方向)。
EcoRⅠ | EcoRⅤ | MboⅠ |
5'-G↓AATTC-3'3'-CTTAA↑G-5' | 5'-GAT↓ATC-3'3'-CTA↑TAG-5' | 5'-GA↓TC-3'3'-CT↑AG-5' |
NotⅠ | HindⅢ | SacⅠ |
5'-GC↓GGCCG-3'3'-CGCCGG↑CG-5' | 5'-A↓AGCTT-3'3'-TTCGA↑A-5' | 5'-GAG↓CTC-3'3'-CTC↑GAG-5' |
氨芐青霉素、卡那霉素
氨芐青霉素、卡那霉素
的固體培養(yǎng)基上進行篩選,能在該培養(yǎng)基上形成菌落的大腸桿菌是否一定含有Ech基因?請判斷并說明理由 不一定,含抗生素基因的未重組載體也可轉(zhuǎn)化大腸桿菌,使大腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上正常生存
不一定,含抗生素基因的未重組載體也可轉(zhuǎn)化大腸桿菌,使大腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上正常生存
。除選擇培養(yǎng)基外,可用于檢測轉(zhuǎn)基因是否成功的生物技術(shù)還有 PCR、抗原—抗體雜交、核酸分子雜交
PCR、抗原—抗體雜交、核酸分子雜交
(答2種)。【答案】酵母菌不能直接利用淀粉作為碳源;稀釋涂布平板法;引物2和引物3;EcoRⅠ和HindⅢ;5'—GAATTCATG—3'和5'—AMGCTTTCA—3';氨芐青霉素、卡那霉素;不一定,含抗生素基因的未重組載體也可轉(zhuǎn)化大腸桿菌,使大腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上正常生存;PCR、抗原—抗體雜交、核酸分子雜交
【解答】
【點評】
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