湖北麻城老米酒具有悠久的歷史，以營(yíng)養(yǎng)豐富、保健養(yǎng)生而著稱?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）老米酒是以糯米為原料，經(jīng)糖化、酒化等過(guò)程發(fā)酵而來(lái)的。糯米需經(jīng)糖化后才能被釀酒酵母轉(zhuǎn)化成酒精，原因是

酵母菌不能直接利用淀粉作為碳源

酵母菌不能直接利用淀粉作為碳源

。為監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程中酵母菌數(shù)量的變化，可定期取樣，用

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法計(jì)數(shù)。
（2）老米酒中的原兒茶酸（PCA）具有良好抗菌、抗氧化、抗炎癥等作用。生成PCA的關(guān)鍵酶是烯酰輔酶A水合酶（ECH）。為進(jìn)一步研究ECH的結(jié)構(gòu)，研究人員擬將Ech基因載入原核高效表達(dá)載體，并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，以獲得大量的ECH蛋白。
①圖1所示的引物1～4中，利用PCR獲得Ech基因時(shí)應(yīng)選擇的兩種引物是

引物2和引物3

引物2和引物3

。

②Ech基因和表達(dá)載體的限制酶切位點(diǎn)如圖1、圖2所示，相關(guān)限制酶的識(shí)別序列見表1。為使Ech基因與載體連接并正確表達(dá)，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)需在①所選兩種引物的5'端分別增加限制酶

EcoRⅠ和HindⅢ

EcoRⅠ和HindⅢ

的酶切位點(diǎn)，據(jù)此分析，兩種引物的堿基序列應(yīng)分別為

5'—GAATTCATG—3'和5'—AMGCTTTCA—3'

5'—GAATTCATG—3'和5'—AMGCTTTCA—3'

（按5'→3'方向）。

EcoRⅠ	EcoRⅤ	MboⅠ
5'-G↓AATTC-3'3'-CTTAA↑G-5'	5'-GAT↓ATC-3'3'-CTA↑TAG-5'	5'-GA↓TC-3'3'-CT↑AG-5'
NotⅠ	HindⅢ	SacⅠ
5'-GC↓GGCCG-3'3'-CGCCGG↑CG-5'	5'-A↓AGCTT-3'3'-TTCGA↑A-5'	5'-GAG↓CTC-3'3'-CTC↑GAG-5'

③可將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種到含

氨芐青霉素、卡那霉素

氨芐青霉素、卡那霉素

的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，能在該培養(yǎng)基上形成菌落的大腸桿菌是否一定含有Ech基因？請(qǐng)判斷并說(shuō)明理由

不一定，含抗生素基因的未重組載體也可轉(zhuǎn)化大腸桿菌，使大腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上正常生存

不一定，含抗生素基因的未重組載體也可轉(zhuǎn)化大腸桿菌，使大腸桿菌在選擇培養(yǎng)基上正常生存

。除選擇培養(yǎng)基外，可用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因是否成功的生物技術(shù)還有

PCR、抗原—抗體雜交、核酸分子雜交

PCR、抗原—抗體雜交、核酸分子雜交

（答2種）。