偽狂犬病與乙腦在我國(guó)豬群中廣泛存在，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)發(fā)展造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為此，研究人員擬以偽狂犬病毒為載體，構(gòu)建乙腦病毒主要免疫原性基因PrM重組病毒，為研究豬乙腦病毒與偽狂犬病毒雙價(jià)基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。下圖表示表達(dá)乙腦病毒PrM基因重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建過(guò)程，PK、gG、gD為偽狂犬病的主要抗原基因，TK為偽狂犬病的毒性基因，pgG為啟動(dòng)子，BamHⅠ和EcoRⅠ為兩種限制酶。請(qǐng)分析回答：

（1）催化過(guò)程①的酶有

反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶

反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶

，RT-PCR的進(jìn)行應(yīng)先設(shè)計(jì)針對(duì)PrM基因的特異性引物，下列可作為該過(guò)程的一對(duì)引物是

P1和P4

P1和P4

。
P1：5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3'
P2：5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3'
P3：5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3'
P4：5'GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3'
（2）過(guò)程②在

DNA連接

DNA連接

酶的作用下可形成重組轉(zhuǎn)移載體，研究人員通過(guò)BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切后再電泳的方法進(jìn)行重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定篩選，請(qǐng)?jiān)趫D2中畫(huà)出通用轉(zhuǎn)移載體和重組轉(zhuǎn)移載體酶切并電泳后條帶的大致位置。
（3）研究發(fā)現(xiàn)，偽狂犬病毒在細(xì)胞中增殖的非必需基因占病毒基因組的一半以上，因此，以該病毒為載體的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在

插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖

插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖

，過(guò)程③采用脂質(zhì)體介導(dǎo)共轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞的原理是

細(xì)胞質(zhì)膜的流動(dòng)性

細(xì)胞質(zhì)膜的流動(dòng)性

。
（4）偽狂犬病毒缺失TK、gG等基因會(huì)顯著降低毒力，但不會(huì)影響自身正常繁殖，故重組病毒理論上具有的特點(diǎn)是

能侵染宿主細(xì)胞但不具有致病性

能侵染宿主細(xì)胞但不具有致病性

，若檢測(cè)重組病毒中PrM基因是否成功表達(dá)，可采用的方法是

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

。
（5）該重組病毒能否直接作為基因工程疫苗投入使用，還需要進(jìn)一步探究。請(qǐng)你利用所學(xué)的知識(shí)簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：

給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒，定期觀察其生長(zhǎng)情況并檢測(cè)血漿中相應(yīng)的抗體水平

給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒，定期觀察其生長(zhǎng)情況并檢測(cè)血漿中相應(yīng)的抗體水平

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